淫羊藿苷预处理增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的影响

背景：人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞促炎功能有一定抑制作用，具有抗炎等药理活性的淫羊藿苷是否能增强人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的抑制作用尚不明确。目的：探究淫羊藿苷预处理人牙周膜干细胞后对M1型巨噬细胞的影响。方法：分离培养原代人牙周膜干细胞，并进行鉴定。对THP-1细胞进行诱导，采用免疫荧光染色及PCR进行M1型巨噬细胞鉴定。用含浓度10-7,10-6,10-5,10-4 mol/L淫羊藿苷的α-MEM完全培养基培养人牙周膜干细胞1,3,5,7 d，采用CCK-8法筛选合适的淫羊藿苷浓度进行实验。将α-MEM完全培养基、未处理的人牙周膜干细胞α-MEM条件培养基及淫羊藿苷预处理24 h的人牙周膜干细胞α-MEM条件培养基与RPMI-1640完全培养基以1∶1的比例对M1型巨噬细胞进行条件培养，分别为对照组、未处理组及预处理组，24 h后RT-PCR法检测M1型巨噬细胞炎症因子的mRNA表达情况；ELISA法检测M1型巨噬细胞炎症因子的蛋白表达情况；Western blot检测M1/M2型巨噬细胞表面标记物及核转录因子κB通路相关蛋白的表达。结果与结论：（1）CCK-8检测结果显示，10-7,10-6,10-5,10-4 mol/L淫羊藿苷对人牙周膜干细胞均无细胞毒性，且从第5天起，各浓度都提高了细胞活力，促进细胞增殖，选择10-4 mol/L淫羊藿苷进行后续实验。（2）RT-PCR法及ELISA检测结果显示，与对照组相比，未处理组及预处理组均降低了M1型巨噬细胞白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的表达与分泌（P<0.05），且预处理组低于未处理组（P<0.05）。（3）Western blot检测结果显示，与未处理组相比，预处理组CD86的表达明显降低（P<0.05）；与对照组相比，未处理组和预处理组M2型巨噬细胞表面标志物CD206的表达均升高（P<0.01），且预处理组明显高于未处理组（P<0.01）;M1型巨噬细胞经24 h条件培养后，与对照组相比，核转录因子κB/P65的表达在未处理组和预处理组均有降低（P<0.01）,p-IκBα的表达仅在预处理组降低（P<0.01）；与未处理组相比，预处理组核转录因子κB/P65和p-IκBα的表达均显著降低（P<0.05），而IκBα在3组中的表达差异无显著性意义。（4）上述结果证实，淫羊藿苷增强了人牙周膜干细胞对M1型巨噬细胞的抑制作用，此作用可能与抑制了巨噬细胞的核转录因子κB信号通路相关。