miR-149-3p靶向调节Akt1介导牙周膜干细胞成骨分化的作用机制研究

目的 探讨miR-149-3p靶向调节蛋白激酶B(protein kinase B,Akt1)介导牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells, PDLSCs)成骨分化的作用及机制。方法 选取2022-01月在作者医院口腔科就诊的18～25岁患者因正畸而拔除的前磨牙或第三磨牙，分离牙周膜组织，提取人PDLSCs。免疫组织化学染色法检测角蛋白(pan-cytokeratin)和波形蛋白(vimentin)鉴定人PDLSCs。将人PDLSCs分为对照组、空载组、miR-149-3p inhibitor组和miR-149-3p mimic组。对照组人PDLSCs不进行处理，空载组、miR-149-3p inhibitor组和miR-149-3p mimic组按Lipofectamine 3000说明书方法分别将空载质粒和miR-149-3p inhibitor、miR-149-3p mimic转染到人PDLSCs。实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)检测细胞内miR-149-3p、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、Akt1 mRNA表达；Western blot检测细胞内ALP、Runx2、Akt1蛋白表达。采用Fluo-3 AM探针检测细胞内钙离子。结果 免疫组织化学结果显示，人PDLSCs二氨基联苯胺(diaminobenzidine, DAB)染色vimentin呈阳性，pan-cytokeratin呈阴性，提示PDLSCs提取成功。与对照组和空载组相比，miR-149-3p inhibitor组miR-149-3p表达显著降低，ALP、Runx2、Akt1 mRNA和蛋白表达、细胞内钙离子荧光强度均显著升高(P均<0.05);miR-149-3p mimic组miR-149-3p表达显著升高，ALP、Runx2、Akt1 mRNA和蛋白表达、细胞内钙离子荧光强度均显著降低(P均<0.05)。与miR-149-3p inhibitor组相比，miR-149-3p mimic组miR-149-3p表达显著升高，ALP、Runx2、Akt1 mRNA和蛋白表达、细胞内钙离子荧光强度均显著降低(P均<0.05)。对照组与空载组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 过表达miR-149-3p可靶向抑制Akt1蛋白的表达，从而抑制成骨标志物ALP和Runx2表达，降低人PDLSCs内钙离子浓度，不利于人PDLSCs成骨分化。