T-2毒素抗人食管癌细胞EC1的活性及其机制

目的 研究T-2毒素的抗癌活性，并探讨其作用机制。方法 人食管癌细胞EC109和EC1、人胃癌细胞MGC-803、人肺癌细胞H460及人正常胃黏膜细胞GES-1，各细胞分别分为细胞对照组（二甲亚砜，终浓度<0.01%）和T-2毒素0.375～100 nmol·L-1组，处理细胞24,48和72 h后，采用MTT法检测细胞存活率。EC1细胞分为细胞对照组和T-2毒素5和10 nmol·L-1组，实时无标记动态细胞分析技术（RTCA）进一步分析EC1细胞增殖和迁移；EC1细胞分为细胞对照组和T-2毒素5,10和20 nmol·L-1组，T-2毒素处理48 h后，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期及活性氧（ROS）水平和线粒体膜电位（MMP）,Western印迹法检测细胞色素c、多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、剪切形式PARP、P21、γ-H2AX、P53、Bax和活化胱天蛋白酶3/7蛋白表达。结果 T-2毒素作用EC109,EC1,MGC-803和H460 4种人癌细胞72 h,IC50值分别为6.34,5.54,6.94和5.96 nmol·L-1,T-2毒素对正常胃黏膜细胞GES-1的IC50为16.4 nmol·L-1。在0～25 nmol·L-1浓度范围内，T-2毒素对EC1细胞增殖具有明显抑制作用，且呈浓度和时间依赖性（24 h,r=0.9204;48 h,r=0.9745;72 h,r=0.9772），此外T-2毒素亦可强烈抑制EC1细胞迁移；与细胞对照组相比，T-2毒素5,10和20 nmol·L-1组EC1细胞凋亡率（P<0.01）、G2/M期细胞比例（P<0.01）、ROS含量（P<0.05,P<0.01）、低MMP细胞比例（P<0.01）、细胞质中细胞色素c含量（P<0.01）、剪切形式PARP含量（P<0.01）、P21（P<0.01）和γ-H2AX、P53、Bax及活化胱天蛋白酶3/7含量（P<0.05,P<0.01）均显著升高。结论 T-2毒素通过诱导细胞凋亡和周期阻滞抑制癌细胞生长，其机制与激活线粒体凋亡通路和上调周期抑制因子P21表达有关。