人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65重组抗原酶联免疫吸附法的建立与两种方法的比较分析

目的用我们研制的一种新人巨细胞病毒(HCMV)重组被膜磷蛋白pp65为抗原,建立快速、简便和特异的检测HCMVIgM的间接酶联免疫吸附法(RECELISA)。方法用自行设计、表达的新的HCMVpp65重组抗原,建立RECELISA,并检测100份临床疑似为HCMV感染者血清中HCMVIgM,同时与全病毒为抗原的间接ELISA法(简称全病毒ELISA法)和美国BioCheck试剂盒(简称BioCheck法)检测结果进行比较。结果RECELISA法重组抗原最适量为3.5μg/孔,HRP标记二抗为1∶800,血清稀释度为1∶100;稳定性试验阳性变异系数(CV)为9.5%,重复性试验平均CV值:批内CV4.5%,批间CV9.6%。RECELISA法、全病毒ELISA法和BioCheck法检测HCMVIgM的阳性率分别为44%、50%和45%;RECELISA法的敏感性为95.6%,其特异性(98.2%)高于全病毒ELISA法(90.9%);正确指数为92.8%,与BioCheck法一致性为97.0%。结论用pp65重组抗原建立的RECELISA法具有高度特异性与敏感性,且操作简单、快速,重复性好;与全病毒抗原相比,重组抗原可规模化、标准化生产,且更安全、经济,具有良好的临床应用前景。