淫羊藿苷促前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的实验研究

目的探讨淫羊藿苷（icariin,ICA）促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的机制。方法采用不同浓度(10-1010-5mol/L)的ICA干预前成骨细胞MC3T3-E1 3、6、9天后采用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性检测试剂盒测定ALP活性,确定ICA最适促分化浓度。最适ICA浓度干预前成骨细胞MC3T3-E1 7天后应用实时定量PCR法（real time-polymerase chain reaction,RT-PCR）检测骨形态发生蛋白（BMP）和Wnt/β-catenin信号通路相关分子（BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclin D1）基因表达。ICA分别与BMP、Wnt/β-catenin信号通路抑制剂（Noggin、DKK-1）联合干预前成骨细胞MC3T3-E1后,茜素红钙结节染色观察钙化程度以及Western blot检测BMP-2蛋白表达变化。结果 ICA促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化,且10-9mol/L ICA促进分化的能力最强。与对照组比较,ICA能明显上调BMP和Wnt/β-catenin信号通路相关分子（BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclin D1）mRNA表达（P<0.01）。Noggin或DKK-1能抑制前成骨细胞MC3T3-E1钙化,且两者联合作用时抑制更加明显。与ICA单独作用比较,ICA与DKK1联合干预后BMP-2蛋白表达水平下降（P<0.01）。结论 ICA可能通过Wnt/β-catenin/BMP-2信号通路调控前成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化。